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工作物質又稱為激活介質或增益介質，是產生激光的物理基礎，是3D光纖激光打標機激光器的核心部分，是用來實現粒子數反轉并產生受激輻射的物質體系。它決定了輸出激光的波長以及儀器的結構和性能。
如前所述，并不是任何物質都能作為激光工作物質，也不是任何能實現粒子數反轉的物質都能用來制造實用的激光器，只有能實現能級躍遷的物質才能作為3D動態聚焦激光打標機激光器的工作物質。目前，激光工作物質已有數千種，激光波長已由x光至遠紅外光。
例如氦氖激光器中，通過氦原子的協助，使氖原子的兩個能級實現粒子數反轉。人們總是盡量選用那些在室溫下更容易實現粒子數反轉的物質，而且它們應對激勵源有很強的吸收性，3D動態聚焦激光打標機激光工作物質可分為氣體、液體、間體和半導體4大類。
由于氣體工作物質的均勻性好，使得輸出光束質最較高。氣體激光的單色性和相干性都較間體激光和半導體激光好，光束發散角也很小。大多數氣體工作物質的能最轉換效率較高，容易實現大功率連續輸出。
可作為激光x作物質的氣體種類很豐富，因而氣體激光器的種類也很多，它們發射的譜線范圍很寬，幾乎遍布從紫外到紅外整個光譜區。
此外，氣體激光器結構較簡單。但由于氣體工作物質的濃度低，一般不適合用于尺寸小且功率大的激光器中。
另外，由于氣體的泄漏和損耗，氣體激光器工作壽命較間體激光器短。
用半導體材料做激光工作物質的優點是體積小，調制方便。
缺點是輸出功率小，光束發散角大和相干性差。
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